Преимущества и недостатки ИФА



ИФА применяют для поиска специфических антител к любому инфекционному агенту; поиска антигенов инфекционных или венерологических заболеваний; определения гормонального статуса пациента; выявления онкомаркеров. ИФА используют для диагностики сифилиса, ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов, аутоиммунных заболеваний, хламидийной, герпетической и цитомегаловирусной инфекций.


Преимуществами метода ИФА являются следующие: высокая чувствительность и специфичность, доступность для любых медучреждений, возможность отслеживания динамики заболевания по соотношению уровня антител в разные промежутки времени. Относительный недостаток ИФА заключается в том, что метод выявляет только иммунный ответ - антитела, но не находит самого возбудителя.

С теоретической точки зрения выделяют несколько разновидностей ИФА: прямой, непрямой, конкурентный, метод блокирования. Практически значимым считается только гетерогенный твердофазный иммунный анализ.

Техника постановки ИФА



В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена и антитела, которая приводит к образованию иммунного комплекса. Специалист, проводящий исследование, использует планшет, на поверхности которого имеется антиген конкретного возбудителя. На первом этапе к нему добавляют биологический материал - сыворотку крови пациента. Это приводит к реакции между антигеном и антителом и образованию «особого антигена», который используется на следующем этапе исследования.

Второй этап метода - образование иммунных комплексов в результате реакции между «особым антигеном» и конъюгатом, который представляет собой иммуноглобулин, меченый ферментом пероксидазой хрена. К ним добавляют особый хромоген. Результат — образование в лунке планшета окрашенного вещества, интенсивность которого зависит от количества антител в крови пациента. Оценку результата проводят фотометрированием на многоканальном спектрофотометре путем сравнения оптической плотности исследуемого материала и контрольных образцов. Завершается процесс математической обработкой результатов. От высоты оптической плотности лунки зависит количество антител у пациента. На практике чаще всего применяют планшеты с 96 лунками.

Количество или концентрация антител в единице объема подсчитывают по измерению оптической плотности исследуемой жидкости, после чего сравнивают результат с контрольным образцом.