Принцип метода



Метод тонкослойной хроматографии родился из бумажной хроматографии и первые опыты стали проводиться в 80-х годах 19 века. Активное же использование этого анализа началось только после 1938 года.


Методика ТСХ включает в себя подвижную фазу (элюент), неподвижную фазу (сорбент) и анализируемое вещество. Неподвижная фаза наносится и фиксируется на специальной пластинке пластинке. Пластина может быть изготовлена из стекла, алюминия или пластика — это многоразовые подложки, которые после каждого использования необходимо тщательно мыть, просушивать и готовить для нанесения сорбента. Также возможно использование бумажных пластин, которые утилизируются после использования.

В качестве неподвижной фазы чаще всего используют силикагель, но возможно применение и других сорбентов, например, оксида алюминия. При использовании того или иного сорбента нужно точно соблюдать технологию, чтобы результат был точным, например, так силикагель может выдать некорректный результат, если воздух в лаборатории слишком влажный.

В качестве подвижной фазы используются растворители, например, вода, уксусная кислота, этанол, ацетон, бензол. К выбору растворителя нужно отнестись ответственно, потому что от его качеств (вязкости, густоты, чистоты) напрямую зависит результат хроматографии. Для каждого анализируемого образца подбирается индивидуальный растворитель.

Проведение анализа



Образец необходимо развести в растворителе. Если полного растворения не происходит и остается слишком много примесей, то можно произвести очистку образца методом экстракции.

Нанесение образца на пластину может быть произведено автоматически или вручную. При автоматическом нанесении используется способ микрораспыления, когда каждый образец спреем наносится на соответствующий участок подложки. Для ручного нанесения используется микрокапилляр. На пластинке карандашом ставятся метки для каждого образца. Каждый образец с помощью капилляра наносится на пластину в одну линию на достаточном расстоянии от меток, чтобы не вступить в реакцию с углеродом из грифеля.

Пластина помещается в сосуд, на дне которого налит элюент. Подложка помещается одним краем в сосуд до отмеченной линии. Сосуд плотно закрывают, чтобы избежать испарения подвижной фазы. Под действием капиллярных сил элюент начинает подниматься вверх по слою сорбента. Когда элюент достигает определенного уровня, пластину вынимают из сосуда и высушивают.

Если искомое вещество не имеет цвета, то на подложке его видно не будет. Поэтому производится визуализация — обработка пластинки парами йода или другими красителями.

После такой обработки производится оценка результата. На сорбенте проявляются окрашенные участки той или иной интенсивности. Для определения вещества (или группы веществ) окрашенные участки, их размер, интенсивность и подвижность сравнивают с эталонным образцом.

Метод ТСХ получил широкое применение, потому что он быстр, дешев, точен, нагляден, не требует сложного оборудования, легко интерпретируется.